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cDNAライブラリ作成について。

簡潔に言いますとcDNAライブラリ作成にリンカーは必要でしょうか?

全mRNAからcDNAを作りベクターアームを連結、パッケージング、大腸菌に感染といけば得られるわけですが、よく調べてみるとベクターアームを連結する際にリンカーを用いている場合と用いていない場合があることに気付きました。

投稿日時 - 2009-09-03 23:47:36

QNo.5260899

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回答(2)

ANo.2

otx

cDNAライブラリを作製して実験をする上で、重要なことの1つは
「cDNAライブラリから全長cDNAを得るか」です。

cDNAを制限酵素で切断すると、例えばある遺伝子は10ヶ所その制限酵素サイトが内部に存在する場合、その遺伝子を得るにはそのすべてを集めてこなければなりません。

それで、作製したcDNAに後から制限酵素サイトをつけてやれば、
制限酵素で処理することなく、ファージDNAに組み込めるのでいいと思いませんか?

投稿日時 - 2009-09-04 10:03:34

ANo.1

otx

何と言いますか、何を念頭に置いて疑問に思ってらっしゃるかわかりませんでした。

まず、ファージDNAにcDNAをライゲーションしなければなりません。
その時、ファージDNAの末端がある制限酵素のサイトである場合、
どうにかしてcDNAの末端にその制限酵素のサイトを組み込む必要があります。
その場合、リンカーでサイトを付加するか、他の方法で付加するかという話です。

つまり、どのような方法でするかという方針であって、
必要なのか不必要なのか?という話ではないのですが・・・。

最初にも申しましたが、何を念頭に置いていらっしゃるのかわかれば、
より的確な回答が出来ると思います。

投稿日時 - 2009-09-04 08:04:20

補足

ご回答ありがとうございます。
私の見解としては昨夜は
「ゲノムライブラリ作成と同じようにcDNAとファージDNAを
同一制限酵素で切断すれば付着末端が得られるので、別にリ
ンカーを外部から付加しなくてもいいんじゃないかなぁ・・・」
程度に考えていたんです。

でも夜中考えていてcDNAはmRNAから得られる発現配列なので
もしかしたら制限酵素で切断したらまずいかも・・・
と考えが巡っている状態です(泣)

よろしくお願いします。

投稿日時 - 2009-09-04 09:43:09

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